自動(dòng)定氮儀測定食用菌中的蛋白質(zhì)
凱氏定氮法由KJELTEC于1833年提出后，經(jīng)不斷改進(jìn)，已演變?yōu)楝F(xiàn)在的常量法、微量法、半微量以及自動(dòng)定氮儀法。目前凱氏定氮法為食品標(biāo)準(zhǔn)(GB/T5009.5-2003)中蛋白質(zhì)的測定方法，但該法前處理消化費(fèi)時(shí)，大批量樣品的消化和測定較為困難，操作繁瑣，蒸餾容易倒吸，并且滴定時(shí)易受人為視覺誤差的影響。全自動(dòng)定氮儀則具有操作簡單、省時(shí)快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，已在食品、肥料、飼料等多領(lǐng)域的氮素測定中得到廣泛應(yīng)用。
食用菌營養(yǎng)豐富并兼有食療價(jià)值，富含人體必需的各種礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、氨基酸和多糖等，蛋白質(zhì)含量是衡量其營養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)之一。本文對(duì)自動(dòng)定氮儀法測定食用菌中的蛋白質(zhì)進(jìn)行了研究及論證。
1材料
1.1樣品來源
實(shí)驗(yàn)用香茹、平菇、灰樹花、雙孢蘑菇、秀珍菇等樣品均購于當(dāng)?shù)爻小?/FONT>
1.2儀器與試劑
KJELTEC2300全自動(dòng)定氮儀；基爾特克消化器(瑞典福斯特卡托公司)；電子分析天平(精密度為0.0001g)等。
0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、10g/L硼酸溶液、400g/L氫氧化鈉溶液、lg/L溴甲酚綠溶液、1g/L甲基紅溶液、濃硫酸、催化劑(以上試劑均為分析純，均用不含氨的蒸餾水配制)。
2方法
2.1樣品消化
準(zhǔn)確稱取一定量的樣品(稱準(zhǔn)至0.0001g)移入消化管中，添加適量催化劑，加入12mL濃硫酸蓋上滌氣蓋。將消化管放入已預(yù)熱至420e的消化器上進(jìn)行消化，消化至全部樣品變?yōu)橥该鞯乃{(lán)綠色澄清液體，同時(shí)將抽氣泵水龍頭打開，排除消化時(shí)產(chǎn)生的廢氣。根據(jù)樣品種類消化時(shí)間在30~60min。消化完畢，冷卻15~20min，蒸餾測定。
2.2蒸餾測定原理
自動(dòng)定氮儀法的原理與國標(biāo)法相同，即樣品經(jīng)消化后，蛋白質(zhì)中的氮轉(zhuǎn)化為氨并與硫酸結(jié)合生成硫酸銨，然后加堿蒸餾，使氨蒸出，用硼酸吸收后用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，計(jì)算出氮的量，乘以換算系數(shù)6.25，即為蛋白質(zhì)含量。
2.3測定
將已消化好的樣品消化管直接放入自動(dòng)定氮儀上按儀器的要求進(jìn)行蒸餾測定，同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。整個(gè)測定過程蒸餾、滴定、數(shù)字處理僅需4~5min即可完成。
3結(jié)果
3.1加標(biāo)回收試驗(yàn)
取6份不同種類的食用菌樣品，在前處理消化時(shí)就分別加入硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)物，進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，經(jīng)測定回收率均在99.5%~100.0%，平均回收率為99.73%，完全符合蛋白質(zhì)測定的要求。
3.2兩種方法的比較
對(duì)不同種類、蛋白質(zhì)含量不同的食用菌樣品，分別用國標(biāo)法和自動(dòng)定氮儀法平行5次測定。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P>0.05，證明這兩種方法測定結(jié)果無顯著性差異。
3.3自動(dòng)定氮儀法精密度實(shí)驗(yàn)
取6份不同種類的食用菌樣品，分別進(jìn)行5次平行測定。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其變異系數(shù)在0.34%~0.73%，符合國標(biāo)方法允許誤差的要求。
4結(jié)論
4.1用自動(dòng)定氮儀法測定食用菌中的蛋白質(zhì)，操作方法簡單，分析速度快，安全可靠，省時(shí)省力。該方法具有很高的精密度和準(zhǔn)確性，對(duì)測定食用菌中的蛋白質(zhì)具有較強(qiáng)的實(shí)用性和可靠性，并可大批量測定，大大提高了工作效率。
4.2用自動(dòng)定氮儀法測定樣品中的蛋白質(zhì)，容易影響測定結(jié)果的注意事項(xiàng):?用于吸收氨的硼酸溶液的顏色應(yīng)為灰紅色，如顏色太紅，可用稀NaOH或稀HCl調(diào)節(jié)使溶液呈灰紅色為止。也可通過滴定空白來判斷，即滴定消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的毫升數(shù)要小于0.2mL，一般空白值在0.06mL左右可穩(wěn)定。?為減少滴定誤差，蒸餾前一定要除去滴定器管壁上的氣泡，排完氣泡后用蒸餾水多次沖洗吸收池；同時(shí)排盡吸收液管內(nèi)上一次測定時(shí)留下的吸收液，換上新液，然后開始測定空白，以減少測定空白的次數(shù)，使空白值盡快穩(wěn)定。
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