半自動定氮儀在食品蛋白質(zhì)含量測定的優(yōu)勢
來源： http://www.s1an.cn/ 類別：實用技術(shù) 更新時間：2014-05-26 閱讀次
凱氏定氮法是我國各類食品蛋白質(zhì)含量測定的標(biāo)準(zhǔn)方法，但是，在實際工作中也存在著一些不盡如人意的地方，最突出的表現(xiàn)在樣品消化處理上，消化的溫度不僅高而且時間很長，這也就導(dǎo)致了整個測定分析實驗的時間長。因此能夠快速測定食品蛋白質(zhì)含量的方法，有著十分重要的意義。
我們根據(jù)工作實際及積累的工作經(jīng)驗對這方面的問題進(jìn)行了一些探討,選用富含糖類、脂類的速溶奶粉為對象,采用三氯乙酸沉淀法分離出奶粉中的乳蛋白,然后采用甲醛固定法測定出其游離氨基含量,并通過與其凱氏定氮測出的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行比較,得出了奶粉蛋白質(zhì)含量與奶粉的游離氨基含量之間的比例關(guān)系,結(jié)果令人滿意,同時避免了樣品消化處理等繁瑣步驟,達(dá)到了快速測定的目的。現(xiàn)將具體的操作簡介如下:
1.儀器與試劑:半自動定氮儀、精密pH計,電磁攪拌器、離心機(jī)、10%三氯乙酸溶液、0.06NNaOH溶液、36%甲醛溶液、0.05NHCI溶液、2%硼酸溶液、指示劑等以及樣品消化用試劑,均采用AR級試劑。
2.方法:取不同廠家、不同批號的奶粉樣4個,稱取129左右溶解后定容至looml,振蕩均勻后按下述處理進(jìn)行.
2.1凱氏定氮:取sml樣品溶液加人15ml濃HZSO;、1.59KZSO一、Zml10%CuSO‘,然后在紅外爐上450oC消化處理至完全透明;冷卻后消化液定容至100ml,取20ml在蒸餾器上加堿蒸餾,餾出液用2%硼酸吸收并用0.05NHCI滴至終點,平行一次,同時作空白試驗。根據(jù)測定結(jié)果計算奶粉中蛋白質(zhì)含量(g八009).
2.2甲醛固定法測氨基:取10ml樣品溶液加人到大離心管中,加人10ml三氯乙酸溶液后混勻,放置10min,離心smin(4000轉(zhuǎn)/分);傾去上層清液后,沉淀用50一60ml去C02水,分次將其轉(zhuǎn)移至250ml燒杯中,隨后置于電磁攪拌器上并先用0.06NNa0H調(diào)節(jié)pH至8.
2;再加人20ml甲醛溶液,imin后用o.o6NNa0H調(diào)節(jié)pH至9.2,并記錄其堿消耗體積;平行一次并作空白試驗;根據(jù)測定數(shù)據(jù)計算奶粉中氨基含量(mmol/g)。
3.半自動定氮儀測定結(jié)果:4個樣品的測定結(jié)果，將各樣品的蛋白質(zhì)含量除以其氨基含量可以得到結(jié)果，可見,在不同的4個樣品中蛋白質(zhì)含量與氨基含量比值差異甚微,平均為1.835(S=0.0049,C,=0.27%),說明了奶粉中蛋白質(zhì)的含量與其甲醛法測定出的氨基含量成正比,因而也表明了在實際工作中直接利用甲醛固定法測定蛋白質(zhì)含量是可行的。若直接利用1.835的常數(shù)與表2中的結(jié)果相乘則可計算出4個樣品的蛋白含量分別為(g/g):0.1879、0.2147、0.2019、0.1237，結(jié)果幾無差別。
通過半自動定氮儀以及其它相關(guān)試劑的測定分析，我們可以總結(jié)出，在利用0.05一0.06NNa0H溶液進(jìn)行測定1.29樣品的游離氨基時,即使是滴定誤差為土0.04ml,其蛋白質(zhì)含量的誤差也只有士0.0049/g,基本可以滿足一般分析的耍求,但是與凱氏定氮法相比卻省去了消化處理,而且由于利用三氯乙酸沉淀分離出乳蛋白,可以除去一些雜質(zhì)的干擾,因此不僅省時省力,且其結(jié)果更準(zhǔn)確可靠.
我們根據(jù)工作實際及積累的工作經(jīng)驗對這方面的問題進(jìn)行了一些探討,選用富含糖類、脂類的速溶奶粉為對象,采用三氯乙酸沉淀法分離出奶粉中的乳蛋白,然后采用甲醛固定法測定出其游離氨基含量,并通過與其凱氏定氮測出的蛋白質(zhì)含量進(jìn)行比較,得出了奶粉蛋白質(zhì)含量與奶粉的游離氨基含量之間的比例關(guān)系,結(jié)果令人滿意,同時避免了樣品消化處理等繁瑣步驟,達(dá)到了快速測定的目的。現(xiàn)將具體的操作簡介如下:
1.儀器與試劑:半自動定氮儀、精密pH計,電磁攪拌器、離心機(jī)、10%三氯乙酸溶液、0.06NNaOH溶液、36%甲醛溶液、0.05NHCI溶液、2%硼酸溶液、指示劑等以及樣品消化用試劑,均采用AR級試劑。
2.方法:取不同廠家、不同批號的奶粉樣4個,稱取129左右溶解后定容至looml,振蕩均勻后按下述處理進(jìn)行.
2.1凱氏定氮:取sml樣品溶液加人15ml濃HZSO;、1.59KZSO一、Zml10%CuSO‘,然后在紅外爐上450oC消化處理至完全透明;冷卻后消化液定容至100ml,取20ml在蒸餾器上加堿蒸餾,餾出液用2%硼酸吸收并用0.05NHCI滴至終點,平行一次,同時作空白試驗。根據(jù)測定結(jié)果計算奶粉中蛋白質(zhì)含量(g八009).
2.2甲醛固定法測氨基:取10ml樣品溶液加人到大離心管中,加人10ml三氯乙酸溶液后混勻,放置10min,離心smin(4000轉(zhuǎn)/分);傾去上層清液后,沉淀用50一60ml去C02水,分次將其轉(zhuǎn)移至250ml燒杯中,隨后置于電磁攪拌器上并先用0.06NNa0H調(diào)節(jié)pH至8.
2;再加人20ml甲醛溶液,imin后用o.o6NNa0H調(diào)節(jié)pH至9.2,并記錄其堿消耗體積;平行一次并作空白試驗;根據(jù)測定數(shù)據(jù)計算奶粉中氨基含量(mmol/g)。
3.半自動定氮儀測定結(jié)果:4個樣品的測定結(jié)果，將各樣品的蛋白質(zhì)含量除以其氨基含量可以得到結(jié)果，可見,在不同的4個樣品中蛋白質(zhì)含量與氨基含量比值差異甚微,平均為1.835(S=0.0049,C,=0.27%),說明了奶粉中蛋白質(zhì)的含量與其甲醛法測定出的氨基含量成正比,因而也表明了在實際工作中直接利用甲醛固定法測定蛋白質(zhì)含量是可行的。若直接利用1.835的常數(shù)與表2中的結(jié)果相乘則可計算出4個樣品的蛋白含量分別為(g/g):0.1879、0.2147、0.2019、0.1237，結(jié)果幾無差別。
通過半自動定氮儀以及其它相關(guān)試劑的測定分析，我們可以總結(jié)出，在利用0.05一0.06NNa0H溶液進(jìn)行測定1.29樣品的游離氨基時,即使是滴定誤差為土0.04ml,其蛋白質(zhì)含量的誤差也只有士0.0049/g,基本可以滿足一般分析的耍求,但是與凱氏定氮法相比卻省去了消化處理,而且由于利用三氯乙酸沉淀分離出乳蛋白,可以除去一些雜質(zhì)的干擾,因此不僅省時省力,且其結(jié)果更準(zhǔn)確可靠.
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